[张贴报告]基于纳米材料的CRISPR/Cas制备及在环境耐药性中的应用

基于纳米材料的CRISPR/Cas制备及在环境耐药性中的应用
编号:3074 稿件编号:2908 访问权限:私有 更新:2023-04-25 20:05:49 浏览:120次 张贴报告

报告开始:2023年05月06日 08:00 (Asia/Shanghai)

报告时间:0min

所在会议:[SP] 张贴报告专场 » [SP-5-1] 5、环境科学

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摘要
抗生素耐药性正在全球蔓延,为响应“ONE HEALTH”理念,减少相关健康和生态环境风险,迫切需要开展有效缓解环境耐药性的相关研究。CRISPR/Cas9基因编辑技术在清除耐药基因上有着巨大的潜力,但目前缺乏有效的CRISPR/Cas9递送系统。本研究以氮掺杂碳点(nitrogen-doped carbon dots,NCDs)为纳米载体,通过共价结合负载Cas9蛋白,合成NCDs-Cas9/sgRNA纳米复合材料。采用SDS-PAGE和TEM等方法表征NCDs和Cas9蛋白之间的偶联。以携带常见耐药基因(tetcat,和aph(3')-Ia)的大肠杆菌(Escherichia coliE. coli)为研究对象,实现了NCDs-Cas9/sgRNA对E. coli 细胞内耐药基因的敲除(27.1-46%);并通过荧光显微镜观察NCDs-Cas9/sgRNA在E. coli 的分布,结合qRT-PCR和流式细胞术验证耐药基因的敲除。此外,构建了NCDs-Cas9/sgRNA的多重基因编辑系统:装载3种sgRNA的NCDs-Cas9/sgRNA同时敲除E. coli tetcat,和aph(3')-Ia基因,并在无菌土中验证了NCDs-Cas9/sgRNA对土壤环境中耐药基因的编辑。本研究制备了一种快速而精准的基于纳米材料的耐药基因多重编辑,展示了CRISPR/Cas9从基因水平减少环境抗生素耐药性的潜力,为应用CRISPR/Cas9开展环境耐药性污染治理提供了技术支撑。
 
关键字
抗生素耐药性,CRISPR/Cas9,纳米递送,氮掺杂碳点,基因编辑
报告人
杜昊
硕士 江南大学

稿件作者
杜昊 江南大学;环境与土木工程学院;环境过程与污染控制研究所
陈菲然 江南大学;环境与土木工程学院;环境过程与污染控制研究所
王震宇 江南大学;环境与土木工程学院;环境过程与污染控制研究所
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